Показания к анализу крови на определение группы крови

Всего столетие тому назад люди еще не имели такого подробного представления о составе кровяного русла и тем более, сколько групп крови существует, какое может сейчас получить любой интересующийся. Открытие всех групп крови принадлежит нобелевскому лауреату австрийскому ученому Карлу Ландштейнеру и его коллеге по исследовательской лаборатории. Группа крови как понятие стало употребляться с 1900 года. Разберемся, какие группы крови существуют и их характеристика.

Что это такое

Группа крови – это признак генетической предрасположенности (наследственный тип признака). На поверхности эритроцитов (кровяных клеток) расположены особые белки (антигены), которые определяют наследственные признаки человека. Когда иммунная система человека выявляет в своем организме чужие виды белка (нехарактерные для данного организма), в крови начинают вырабатываться антитела. Белки антител обладают свойством склеиваться и взаимодействовать с чужими видами тел. Таким образом проявляется природная защита иммунной системы человеческого организма.

Выделяют два вида антигенов в эритроцитах, сочетание которых делит всех людей по группам крови – А-антиген и В-антиген. С помощью анализа крови на группу крови и определяют данные антигены.

Различают следующие основные типы группы крови:

  • группа I (0) – поверхность эритроцитов крови не содержит антигены типа А и антигены типа В;
  • группа ІІ (А) – поверхность эритроцитов крови содержит антигены типа А;
  • группа III (В) – поверхность эритроцитов крови содержит антигены типа В;
  • группа IV (АВ) – поверхность эритроцитов крови содержит антигены типа А и антигены типа В.

Что это такое?

Цоликлон – моноклональное антитело, образующееся путем генной инженерии. Чаще всего, для его получения используют мышей – животному вводят специальный антиген, а после получают асцитную жидкость грызуна, в которой и содержатся указанные антитела.

Морфологически, они относятся к иммуноглобулинам класса М, т.е. антителам острой фазы. Механизм действия их обусловлен образованием комплекса антиген-антитело, где в качестве антигена выступают некоторые молекулы (в данной ситуации – белки, определяющие группу крови и ее резус), расположенные на мембране клетки.

Какие существуют препараты цоликлонов?

Что это такое?

В настоящее время, в лабораторной диагностике используется 3 типа стандартных цоликлонов – анти-А, анти-В и анти-АВ. Каждый из них вступает в реакцию со специфичным для него антигеном, обуславливая развитие иммунной реакции.

Эти препараты выпускаются в виде ампул или флаконов, содержащих 5 или 10 мл раствора антител. Все они имеют специфическую окраску, по которой и проводится определение каждого типа:

  • анти-А окрашен в красный цвет;
  • анти-В выпускается в виде раствора синего цвета;
  • комбинированный цоликлон анти-АВ (или анти-D) специфической окраски не имеет.

Цоликлон анти-АВ может быть модифицированным и использоваться для определения резус фактора.

Методика исследования

Алгоритм исследования достаточно прост, специальной подготовки к исследованию от пациента не требуется.

Что это такое?

Определение группы может проводиться в нативной крови как с использованием консерванта, так и без него. Для исследования берут капиллярную кровь из пальца пациента.

Обязательно соблюдать условия окружающей среды для получения достоверной информации: анализ проводится в хорошо освещенном помещении с умеренной влажностью и температурой не ниже 20 градусов.

Кроме того, следует удостовериться, что кровь была взята у пациента правильно, а срок годности используемых реагентов еще не истек.

На специальную пластину (или планшетку), на расстоянии друг от друга с помощью специальной пипетки наносят по 1 крупной капле каждого из антител (для удобства, лучше располагать их так – А, В, АВ). Возле каждой из капель цоликлонов необходимо поместить по одной капле исследуемой крови и при покачивании планшетки постепенно их перемешать.

Визуально, результаты исследования можно определить уже через 5-10 секунд после начала анализа. В исследуемой крови обнаруживаются так называемые “красные конгломераты” – склеившиеся эритроциты.

Образуются они в результате реакции агглютинации, т.е. в том случае, когда цоликлон соответствует антигену (в том числе и при исследовании на резус-фактор).

Что это такое?

Если же агглютинации не наблюдается, то соответственно имеется расхождение между исследуемыми антигенами и имеющимися антителами.

Шаг 3. Происходит реакция слипания эритроцитов

Интерпретация результатов

Как проводится оценка результатов исследования и определение групповой принадлежности?

Как уже говорилось выше, результат исследования определяется по наличию реакции агглютинации визуально или с помощью анализаторов:

  • если ее нет ни в одной из капель, значит исследуемая кровь имеет первую группу.
  • когда она наблюдается в ячейке, где расположен цоликлон анти-А, значит в исследуемой крови содержится данный антиген. Таким образом, исследуемая кровь может быть как второй (генотип АА или А0) или 4 (АВ) групп.
  • если агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В, то исследуемая кровь 3 (ВВ, В0) или 4 группы.
Что это такое?

Шаг 4. Определение группы крови

Для проверки правильности результатов на планшетке и добавляется цоликлон анти-АВ (обладающий свойством определять и резус-фактор). Он, в какой-то мере является контрольным, так как именно по наличию в нем агглютинатов судят о правильности проведенного анализа. Если реакция произошла во всех ячейках, значит исследуемый образец относится к 4 группе крови.

Возможна ситуация, когда агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-АВ, а в других образцах ее нет. В таком случае можно говорить о неправильно проведенном анализе, и проводят повторное определение группы и резус-фактора.

Как установить группу с помощью анти-А, анти-В и анти-D?

Для того, чтобы узнать группу крови, необходимо прежде всего подготовить все необходимое для этого. Поэтому вам понадобится:

  • специальный планшет с семью небольшими лунками;
  • три цоликлона: анти – А, анти – В и анти – D;
  • три пипетки;
  • изотонический раствор натрий хлора;
  • шприц для забора крови;
  • спирт;
  • вата;
  • жгут.
  1. Начинать процедуру необходимо с забора крови. Обычно используют кровь, взятую из вены. Но в некоторых случаях применяют кровь из пальца. Набрав небольшое количество крови можно приступать к проведению самой процедуры.
  2. Проследите за тем, чтобы температура воздуха в помещении, где будет проводиться процедура была не более 25 С. Начинать необходимо с нанесения по одной небольшой капле цоликлонов в лунки планшета.
  3. В первую лунку капнуть цоликлон анти – А, во вторую анти – В и в ту, которая располагается сбоку поместить анти – D.

    Обратите внимание, что каждый вид цоликлона нужно наносить разными пипетками, чтобы они не имели возможности смешаться. В противном случае результаты нельзя считать достоверными и процедуру необходимо будет делать заново.

  4. После этого необходимо добавить по одной капле крови к каждому цоликлону и аккуратно смешать две эти жидкости.
  5. После этого нужно аккуратно раскачивать планшет на протяжении 3 минут.
  6. Результаты можно будет наблюдать уже после 10 – 15 секунд, но для более достоверного результата необходимо подождать 3 минуты. Предварительные результаты можно определять по истечению этого времени. Однако после этого необходимо в каждую лунку добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия и смешать жидкости.
  7. После этого нужно на протяжении 3 – 5 минут раскачивать планшетку и уже затем окончательно определять группу и резус – фактор.

При определении группы крови и резус-фактора вы сразу же обратите внимание на то, что под тремя ленками, которыми вы будете пользоваться находится еще три таких же. Они необходимы для повторного определения, если оно может понадобиться.

Существует всего 4 группы крови:

  • I (0);
  • II (А);
  • III (В);
  • IV (АВ).

После того, как вы смешаете цоликлоны с каплями крови и подождете около трех минут, вам необходимо будет приступать к определению результата. О том, какая группа крови в данном определенном случае будет свидетельствовать произошедшая реакция агглютинации. Это значит, что в определенной лунке эритроциты стали похожими на зернышки небольших размеров. А при добавлении в них изотонического раствора натрий хлора они не изменили свой начальный вид.

Как проводится исследование

Алгоритм определения группы крови цоликлонами состоит в следующем. Лабораторное тестирование осуществляется при помощи 3 видов этих веществ:

  • «Анти-A» красного цвета, такой же оттенок имеет бутыль, крышка и этикетка препарата.
  • «Анти-B» имеет синий цвет, а также крышку, бутыль и этикетку, окрашенные в синий тон.
  • «Анти-D» — бесцветный и находится в прозрачной бутылке.

При определении резус-фактора цоликлонами нельзя применять некачественные реагенты. Если флакон имеет дефекты или внутри жидкости есть осадок, то реагент потеряет свое действие. Чтобы определить группу, медицинский работник наносит цоликлоны на лабораторную пластину, выполненную в виде таблицы. Наносятся реагенты разных типов (A, B и D). Каждый образец подписывается. Цоликлон наносят на отмеченный участок. Каждый вид реагента берут своей пипеткой.

Рядом с сывороткой капают по 1 капле крови человека, затем чистой палочкой ее размешивают с реагентами. Через несколько секунд начнется реакция. Лаборант проводит наблюдение за реагентами 3 минуты. Потом можно расшифровывать результат анализа.

Методы определения категорий крови

Диагностика на вычисление групп крови проводится после получения венозного или кровяного материала пациента. Чтобы установить резус-фактор понадобится кровь из вены, которую соединяют с двумя сыворотками (положительная и отрицательная).

О наличии у пациента того или иного резус-фактора свидетельствует образец, где нет агглютинации (склеивания эритроцитов).

Для определения группы кровяной массы используют следующие способы:

  1. Экспресс-диагностика применяется в экстренных случаях, ответ можно получить уже спустя три минуты. Осуществляется она с использованием пластиковых карточек с нанесенными на дно высушенными реактивами. Показывает одновременно группу и резус.
  2. Двойная перекрестная реакция используется для уточнения сомнительного результата исследования. Оценивают результат после смешивания сыворотки пациента с эритроцитарным материалом. Сведения доступны для интерпретации уже спустя 5 минут.
  3. Цоликлонирования при этом способе диагностики натуральные сыворотки подменяются искусственными цоликлонами (анти-А и -В).
  4. Стандартное определение категории кровотока выполняется путем соединения нескольких капель крови пациента с образцами сыворотки с четырьмя экземплярами известных антигенных фенотипов. Результат доступен в течение пяти минут.

Если агглютинация отсутствует во всех четырех образцах, то такой признак говорит, что перед вами первая группа. И в противоположность этому, когда во всех пробах происходит слипание эритроцитов, то этот факт указывает на четвертую группу. Касаемо второй и третьей категории крови, о каждой из них можно судить, в случае отсутствия агглютинации в биологическом образце сыворотки определяемой группы.

Почему меняется резус-фактор

Белки, отвечающие за определение резус-фактора, «живут» на оболочке эритроцитов. Именно поэтому в случае сильного повышения количества красных клеток в плазме анализ может показать не только неверную группу, но и не тот резус-фактор, который есть на самом деле. Кроме того, результаты лабораторного исследования могут исказиться и при наличии в организме белков, которые в определенных обстоятельствах демонстрируют те же характеристики, что и вещества, отвечающие за «плюсовый» резус.

Кроме того, в истории современной медицины известен один случай изменения резус-фактора, который пока что не нашел научного объяснения. Девятилетней девочке Деми Ли Бреннан сделали пересадку печени, после чего ее кровь из первой «отрицательной» превратилась в первую «положительную». Но больше таких случаев мировой медицине не известно [4].

Лучшие материалы месяца

  • Коронавирусы: SARS-CoV-2 (COVID-19)
  • Антибиотики для профилактики и лечения COVID-19: на сколько эффективны
  • Самые распространенные «офисные» болезни
  • Убивает ли водка коронавирус
  • Как остаться живым на наших дорогах?

Методики определения групп крови, описание таблицы

Практически каждый человек хотя бы единожды за свою жизнь проходил тест для установления принадлежности группы крови. О методах проведения данного анализа и об их достоверности пойдет речь далее.

Для чего проводится диагностика?

Группа крови – это определенный ряд антигенов, размещенных на поверхности эритроцитов, которые и определяют их специфичность. Таких антигенов известно очень много, поэтому принято единую классификацию крови по АВО и резус-фактору.

Этот показатель в обязательном порядке определяется у пациентов перед хирургической операцией, военным, полицейским и другим категориям людей, которые могут потребовать срочного переливания крови.

Стандартная методика определения группы крови

Самый распространенный метод исследования данного показателя – это способ с применением стандартной сыворотки. Эта диагностика определяет общепринятые антигены по системе АВО.

Изогеммагглютинирующая сыворотка представляет собой совокупность специальных антител к наружным частичкам эритроцитов.

Если находится совместимый антиген, на который могут воздействовать антитела, то формируется комплекс, способствующий началу иммунно-защитного механизма.

Вследствие этого происходит склеивание эритроцитарных клеток крови (агглютинация). Если подобное происходит, то делается вывод о несовместимости крови.

Данные сыворотки изготавливаются из крови доноров по специальной системе, подразумевающая под собой извлечение плазмы, в которой и содержать антитела, после чего ее разводят изотоником – хлорид натрия, это проходит в несколько этапов:

  • В емкость наливают 1 мл воды, в которой растворено 0,9% обычной соли.
  • В эту же пробирку вносят такое же количество разведенной плазмы.
  • Затем 1 мл данной жидкости вносят в емкость с изотоником.

Процесс позволяет получить соотношение 1:256. Если методика разведения будет нарушена, то есть большая вероятность получения ошибочных результатов.

Метод с использованием цоликлонов

Если нет возможности определить группу крови стандартными сыворотками, то используют данную методику.

Цоликлоны – гибридные антитела, которые получают из в-лимфоцитов крови мышей.

Методики определения групп крови, описание таблицы

Последовательность проведения диагностики такая:

  1. После нанесения отметок на планшет, которые соответствуют виду цоликлона, наносится раствор.
  2. К каждому образцу цоликлона вносят одну каплю диагностированной крови.
  3. Оценка результатов через пять минут.
  4. Для данной методики необходимо соблюдать специальные условия. Они включают в себя пригодность цоликлонов, температуру в помещении и уровень влажности.

Результаты анализов считаются позитивными в том случае, когда при смешивании данных фракций наблюдается реакция агглютинации. Если подобное произошло в двух образцах, то считается, что кровь относится к четвертой группе. Если реакция не наблюдается вовсе, то к первой. Диагностические ошибки в данной методике встречаются не часто.

Быстрый способ «Эритротест»

Выше перечисленные способы используются в медицине уже долгое время и распространены по всему миру. Но ввиду того, что отрасль постоянно развивается, вводятся быстрые диагностические методы по установлению принадлежности к группе крови. Таким нововведением считается и «Эритротест».

Чтобы определить показатель данным способом необходимо иметь следующее оборудование:

  • Стандартный планшет с пятью лунками
  • Скарификатор для прокола и получения биологической жидкости
  • Стеклянная пипетка с резиновой грушей
  • Пипетка для забора реактивов
  • Палочки для смешивания компонентов

Основное преимущество эритротеста состоит в том, что исследование не требует дополнительных условий и доступно в тот момент, когда проведение стандартной диагностики невозможно.

Последовательность проведения

В углублениях планшета размещают цоликлоны к антигенам поверхностного типа и основному, который отвечает за наследственную передачу резус-фактора.

В последнюю лунку добавляют контрольную сыворотку, которая исключит ошибочный результат и верно укажет на принадлежность к той или иной группе.

Оценивание результатов анализа проводится с помощью таблицы, в ней указываются возможные результаты тестирования.

Классификация по системе АВО

Группа крови, определение ее проводится исходя из специально разработанных норм. Существует определенная таблица, которая характеризует каждую группу крови.

Группы Описание
I (0) Эритроцитарные антигенные качества не наблюдаются
II (А) Присутствие антигена А
III (В) Наличие на поверхности эритроцитарных клеток антигена В
IV (АВ) Присутствие обоих антигенов

: Методы определения групп крови:

алгоритм определение группы крови с цоликлонами

Определение группы крови с цоликлонами анти-А и анти-Б

1Вступительное слово: Мы проводим определение группы крови с цоликлонами в процедурном кабинете по назначению врача. На мне шапочка, очки, маска, халат, фартук, перчатки. Руки предварительно обработаны гигиеническим способом.

2 Оснащение:

  1. Цоликлоны анти-А, анти-Б

  2. Исследуемая кровь (пробирка)

  3. Тарелка для определения группы крови.

  4. Стерильные стеклянные палочки 2 шт ( в стакане, чашке Петри)

  5. Изотонический раствор натрия хлорида

  6. Стерильная пипетка 1 шт.

  7. Стерильный капилляр с грушей.

  8. Ёмкость с 3% раствором хлорамина.

3 Техника манипуляции:

  1. Внести цоликлоны в отдельные лунки по одной большой капле.

  2. Внести капилляром маленькие (0,01 мл) капли крови рядом с каплями цоликлонов, избегая контакта капилляра и крови.

  3. Отдельными палочками смешать цоликлоны и кровь.

  4. Покачивать тарелку, наблюдать агглютинацию 2,5 минуты.

  5. Внести пипеткой в лунки, в которых произошла агглютинация по 1й капле физиологического раствора

  6. Покачивать, наблюдать агглютинацию.

  7. Форма ответа:

При определении группы крови с помощью цоликлонов …

  1. Агглютинация не наблюдается ни в одной из лунок – первая группа

  2. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-А – вторая группа

  3. Агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-Б – третья группа

  4. Агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-Б – четвертая группа

  1. После проведения манипуляции все использованные предметы замачиваются в емкости с трехпроцентным раствором хлорамина.

4 Возможные ошибки:

алгоритм определение группы крови с цоликлонами

Грубые ошибки:

  1. Не использование средств защиты медработника.

  2. Повторное использование палочек.

  3. Перенос палочек, контактировавших с кровью над лотком с чистыми палочками.

  4. Не соответствие картины агглютинации заключению о групповой принадлежности.

  5. Не продезинфицированы предметы, контактировавшие с кровью.

Не грубые ошибки:

  1. Время ожидания агглютинации менее 2.5 мин.

  2. Не внесен физраствор в лунки, в которых произошла агглютинация.

  3. Удерживание палочек за концы, а не за центр.

5 Критерии оценивания:

Сдал – отсутствие грубых ошибок, наличие не более двух не грубых ошибок.

Не сдал – наличие грубых ошибок, наличие более двух не грубых ошибок.

При совершении грубой ошибки преподаватель может попросить повторить соответствующий этап манипуляции. Если ошибка повторяется – не сдал. Допускается не более одного повторения.

Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]

Группы крови. Определение группы крови и резус-фактора

Многочисленными исследованиями было показано, что в крови могут находиться различные белки (агглютиногены и агглютинины), комбинацией (наличием или отсутствием) которых и образуются четыре группы крови.

Каждой группе дано условное обозначение: 0 (I), А (II), В (III), AB(IV).Установлено, что переливать можно только одногруппную кровь.

В исключительных случаях, когда нет одногрупповой крови, а переливание жизненно необходимо, допустимо переливание иногруппной крови.

В этих условиях кровь 0 (I) группы можно перелить боль­ным с любой группой крови, а больным, имеющим кровь AB(IV) группы, можно перелить донорскую кровь любой группы.

Поэто­му, прежде чем начинать переливание крови, необходимо точно установить группу крови больного и группу пере­ливаемой крови.

Определение группы крови.

Для определения группы крови пользуются стандарт­ными сыворотками групп 0 (I), А (II), В (III), которые спе­циально готовят в лабораториях станций переливания белой тарелке на расстоянии3—4 см слева на­право ставят цифры I, II, III, обозначающие стандартные сыворотки.

Каплю стандартной сыворотки 0(I) группы наносят пипеткой в сектор тарелки, обозначенный циф­рой I; потом второй пипеткой наносят каплю сыворотки А (II) группы под цифрой II; так же берут сыворотку В (III) группы и третьей пипеткой-наносят под цифрой III.

Затем обследуемому укалывают палец и стеклянной палочкой переносят вытекающую кровь в каплю сыворот­ки, находящейся на тарелке, и смешивают до равномер­ного окрашивания. В каждую сыворотку крови переносят новой палочкой.

Через 5 мин с момента окрашивания (по часам!) по изменению в смеси определяют группу крови.

Группы крови. Определение группы крови и резус-фактора

В той сыворотке, где произойдет агглютинация (склеивание эритроцитов), появляются хорошо видимые красные зернышки и глыбки; в сыворотке, где агглюти­нации не произойдет, капля крови останется гомогенной, равномерно окрашенной в розовый цвет.

В зависимости от группы крови обследуемого агглютинация произойдет в определенных пробах. Если обследуемый имеет 0 (I) группу крови, то склеивания эритроцитов ни с одной сы­вороткой не произойдет.

Если обследуемый имеет А (II) группу крови, то агглютинации не будет только с сыво­роткой группы А (II), а если обследуемый имеет В (III) группу, то агглютинации не будет с сывороткой В (III).

Агглютинация наблюдается со всеми сыворотками, если исследуемая кровь будет AB(IV) группы. 

Иногда даже при переливании одногруппной крови наблюдаются тяжелые реакции. Проведенные исследования позволили установить, что приблизительно у 15% людей в крови отсутствует особый белок, так назы­ваемый резус-фактор.

Если этим лицам провести повтор­ное переливание крови, содержащей этот фактор, то воз­никнет тяжелое осложнение, называемое резус-конфлик­том, и разовьется шок. Поэтому в настоящее время всем больным обязательно проводят определение резус-фак­тора, так как реципиенту с отрицательным резус-фактором можно переливать только резус-отрицательную кровь.

Ускоренный способ определения ре­зус-принадлежности. На стеклянную чашку Петри наносят 5 капель антирезус-сыворотки той же груп­пы, что и у реципиента. В сыворотку добавляют каплю крови обследуемого и тщательно перемешивают. Чашку Петри помещают на водяную баню при температуре 42— 45°С.

Результаты реакции оценивают через 10 мин. Если наступила агглютинация крови, то у обследуемого кровь резус-положительная (Rh+); если агглютинации нет, то исследуемая кровь резус-отрицательная (Rh—).

Разработан ряд других способов определения резус-фактора, в частности с помощью универсального антирезусного реагента D.

Обязательно определение группы крови и резус-принадлежности всем больным, находящимся в стационаре. Результаты исследования должны быть зане­сены в паспорт больного.

Полезные советы

Определение группы и резус-фактора крови с использованием цоликлонов считается одним из самых простых и доступных методов, поэтому широко применяется в лабораториях разного уровня. Кроме того, такой анализ дает достоверные результаты. Однако в некоторых случаях они бывают ложными, а причиной этому становится несоблюдение нескольких правил. Простая инструкция по применению цоликлонов и работа с ними позволит избежать получения недостоверных результатов и необходимости проводить исследование заново:

  • хранить реагенты в холодильнике, при температуре от 2 до 8 градусов, а распечатанный флакон использовать в течение 30 суток;
  • исследования проводятся при комнатной температуре, а в слишком жарком помещении рекомендуется периодически охлаждать стеклянную поверхность планшета;
  • обозначать на планшете разные цоликлоны маркером, поскольку их цвет после добавления крови быстро исчезает;
  • соблюдать правильные пропорции реагентов: если крови будет слишком много, реакция агглютинации эритроцитов будет мало выражена;
  • не допускать смешивания капель жидкости, в которых уже присутствуют разные типы цолкиклонов — в таком случае реакцию придется проводить заново;
  • обозначать окончательный результат не менее, чем через 3 минуты после начала реакции.

Важно также соблюдать последовательность действий во время анализа. Так, если стеклянную поверхность не раскачивать, даже при отсутствии реакции склеивания эритроциты будут расположены в краевой зоне капли. Это может стать причиной неправильной интерпретации результатов. При определении группы крови необходимо учитывать острые и хронические заболевания, которые наблюдаются у пациента. При патологиях печени и органов кроветворной системы, а также болезнях, которые протекают по типу сепсиса, может происходить явление патагглютинации. Эритроциты будут склеиваться даже при контакте с обычным физиологическим раствором. Напротив, при лейкозе кровяные клетки не отреагируют на присутствие антител, и агглютинация не произойдет.

Цоликлоны — это важные реагенты, которые используются ежедневно в гематологических лабораториях. Они позволяют быстро и безошибочно определить группу крови и ее резус без дополнительного оборудования и специальных навыков. Однако важно выполнять простой алгоритм, чтобы результаты анализа действительно были достоверными.

Читайте также:  Лабораторная диагностика хронического панкреатита